په درملو اوبو کې د انډوټوکسین کشف لپاره حل

۴.۱.۱ د نمونې راټولول او پروسس کول
- د نمونې اخیستلو کانتینرونه: د انډوټوکسین څخه پاک شیشې بوتلونه یا د ازموینې ټیوبونه وکاروئ (د انډوټوکسین لرې کولو لپاره د ≥250 ° C په وچه تودوخه کې د 30 دقیقو څخه ډیر تعقیم کولو تابع دي).
- د نمونې اخیستلو طریقې: ① پاکې اوبه/د انجیکشن لپاره اوبه: د نمونې اخیستلو والو خلاص کړئ، د 5-10 دقیقو لپاره اوبه جریان پریږدئ (د پایپ لاین فلش کولو لپاره)، بیا نمونې د غیر منتن کولو شرایطو لاندې راټول کړئ؛ ② د سیسټم په مهمو نقطو کې نمونې اخیستل: د ذخیره کولو ټانک د وتلو په شمول، د توزیع پایپ لاین پای، او د فلټر مخکینۍ او شاته برخه، ترڅو د ټول اوبو سیسټم پوښښ ډاډمن شي.
- د نمونې ذخیره کول: د راټولولو وروسته په 4 درجو سانتي ګراد کې ذخیره کړئ او په 24 ساعتونو کې بشپړ کشف کړئ؛ که چیرې اوږدمهاله ذخیره اړینه وي، نو په -20 درجو سانتي ګراد کې کنګل کړئ، مګر د ویلې کیدو وروسته، نمونه باید په بشپړه توګه مخلوط شي ترڅو د انډوټوکسین غیر مساوي ویش څخه مخنیوی وشي.

۴.۱.۲ د ری ایجنټ او وسایلو چمتو کول
- ریجنټونه: ① د KTA انډوټوکسین اسای کټ (کاینټیک ټربیډیمیټریک میتود، 300 ازموینې / کټ)، د کتلاګ شمیره: KTA300TA.
- وسایل: ۱. د کاینټیک انکیوبیټینګ مایکروپلیټ ریډر ELx808IUBET، د کتلاګ شمیره: 808IUBET؛ ۲. د انډوټوکسین څخه پاک شیشې کمولو ټیوبونه؛ ۳. د انډوټوکسین څخه پاک لارښوونو سره پایپټرونه؛ ۴. د انډوټوکسین څخه پاک ۹۶ څاه مایکروپلیټونه؛ ۵. ورټیکس مکسر؛ ۶. د ټیسټ ټیوب ریک.
- د انډوټوکسن څخه پاک درملنه: ټول هغه وسایل چې د نمونو او ریجنټونو سره په تماس کې وي (لکه د ټیسټ ټیوبونه، پایپټونه، او د پایپټ لارښوونې) باید د 30 دقیقو څخه ډیر وخت لپاره د ≥250 ° C په وچه تودوخه تعقیم شي، یا د پایروجن څخه پاک یو ځلیدونکي وسایل وکاروئ چې د انډوټوکسن څخه پاک وي.

۴.۲.۱ د معیاري منحني چمتو کول
۱. د انډوټوکسین معیار د LAL ریجنټ اوبو سره چې د کټ سره چمتو شوی د غلظت لړۍ ته کم کړئ: ۱۰، ۱، ۰.۱، او ۰.۰۱ EU/ml.
۲. د انډوټوکسین څخه پاک ۹۶ څاه غبرګون پلیټ واخلئ، هرې څاه ته د لړۍ غلظت معیار ۱۰۰ μl اضافه کړئ، او د هر غلظت لپاره ۳ موازي څاه ګانې تنظیم کړئ.
۳. په هر څاه کې ۱۰۰ μl LAL ریجنټ اضافه کړئ، پلیټ پوښلو پرته په نرمۍ سره مخلوط کړئ، او په کاینټیک انکیوبیټینګ مایکروپلیټ ریډر ELx808IUBET کې یې د ۳۷ درجو سانتی ګراد په تودوخې کې د انکیوبیشن لپاره ځای په ځای کړئ.
۴. د ۶۰ دقیقو لپاره په هرو ۳۰ ثانیو کې په ۳۴۰ نانومیټر کې د نظري کثافت (OD) ولولئ.
۵. د دې فورمول په کارولو سره یو معیاري منحنی جوړ کړئ: log10 Y = B(log10 X) + A (چیرې چې Y = د غبرګون وخت (د پیل وخت)، X = د انډوټوکسین غلظت). د ارتباط ضریب (R²) باید ≥0.98 وي.

۴.۲.۲ د نمونې کشف
۱. د نمونې ۱۰۰ μl د تعامل پلیټ څاګانو ته اضافه کړئ (د هرې نمونې لپاره ۲ موازي څاګانې او ۲ خالي کنټرول څاګانې تنظیم کړئ؛ د هر خالي کنټرول څاګانو ته ۱۰۰ μl LAL ریجنټ اوبه اضافه کړئ).
۲. د نمونو د جذب اندازه کولو لپاره پورته د "معیاري منحني چمتو کولو" برخې کې ۳ او ۴ مرحلې تکرار کړئ.
۳. د نمونې د انډوټوکسین غلظت د معیاري منحني پر بنسټ محاسبه کړئ.

۴.۲.۳ د لاسوهنې ازموینه (د تایید کلیدي مرحله)
څرنګه چې د درملو اوبه ممکن هغه مواد ولري چې د LAL تعامل سره مداخله کوي (لکه پاتې شوي صابونونه او فلزي ایونونه)، د نمونو د هرې ډلې لپاره یا د سیسټم غیر منتن کولو وروسته باید د مداخلې ازموینه ترسره شي:
۱. نمونه په دوو ډلو وویشئ: یوه ډله د انډوټوکسین معیاري (سپیک شوي ګروپ) پیژندل شوي غلظت سره سپک شوې ده، او بله ډله نه ده (د نمونې ګروپ).
۲. د دواړو ډلو د انډوټوکسین غلظت په جلا توګه کشف کړئ، او د "بیا رغونې کچه" محاسبه کړئ (د بیا رغونې کچه = [(د سپک شوي ګروپ غلظت - د نمونې ګروپ غلظت) / سپک شوي غلظت] × ۱۰۰٪).
۳. د ۵۰٪-۲۰۰٪ په حد کې د رغیدو کچه د مداخلې نه شتون په ګوته کوي؛ که چیرې دا له دې حد څخه تیر شي، مداخله باید د نمونې کمولو، pH (۶.۰-۸.۰ ته) تنظیم کولو، یا د مداخلې مخنیوی کونکي په کارولو سره له منځه یوړل شي.

۱. د پایلې قضاوت: ① که چیرې د نمونې د انډوټوکسین غلظت د اوبو د کیفیت د اړونده حد څخه ≤ وي (د مثال په توګه، د انجیکشن لپاره د اوبو لپاره ≤0.25 EU/ml) او د مداخلې ازموینه وړ وي، نو نمونه د "وړ" په توګه قضاوت کیږي؛ ② که چیرې غلظت له حد څخه ډیر وي یا د مداخلې ازموینه غیر وړ وي، نو بیا نمونه اخیستل او کشف کول اړین دي. که پایله لاهم غیر وړ وي، نو د انحراف تحقیق باید پیل شي.

۲. د راپور محتوا: باید د نمونې شمیره، د نمونې اخیستلو نقطه، د کشف نیټه، د کشف طریقه، د ریجنټ بیچ شمیره، د معیاري منحني پیرامیټرې، د نمونې غلظت، د مداخلې ازموینې پایلې، د قضاوت پایله، او د کشف کونکي لاسلیک شامل وي، ترڅو د راپور تعقیب ډاډمن شي.